FRET பெப்டைட் தொழில்நுட்பம்

ஃப்ளோரசன்ஸ் அதிர்வு ஆற்றல் பரிமாற்றம் (FRET)

ஃப்ளோரசன்ஸ் அதிர்வு ஆற்றல் பரிமாற்றம் (FRET) என்பது கதிர்வீச்சு அல்லாத ஆற்றல் பரிமாற்ற செயல்முறையாகும், இதில் நன்கொடையாளர் உற்சாகமான நிலை ஆற்றல் உள் மூலக்கூறு மின்சார ஜோடிகளின் தொடர்பு மூலம் ஏற்றுக்கொள்ளும் உற்சாகமான நிலைக்கு மாற்றப்படுகிறது.இந்த செயல்முறை ஃபோட்டான்களை உள்ளடக்கியது அல்ல, எனவே கதிர்வீச்சு அல்ல.இந்த மதிப்பீடு வேகமான, உணர்திறன் மற்றும் எளிமையானதாக இருப்பதன் நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது.

FRET மதிப்பீட்டில் பயன்படுத்தப்படும் சாயம் ஒரே மாதிரியாக இருக்கலாம்.ஆனால் பெரும்பாலான பயன்பாடுகளில், வெவ்வேறு சாயங்கள் உண்மையில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.சுருக்கமாக, ஒளிரும் அதிர்வு ஆற்றலின் பரிமாற்றம் என்பது நன்கொடையாளர் குழு உற்சாகமாக இருக்கும்போது, ​​நன்கொடையாளரிடமிருந்து (சாயம் 1) ஏற்பிக்கு (சாயம் 2) ஒரு ஜோடி இருமுனைகளை மாற்றுவதாகும்.பொதுவாக, டோனர் ஃப்ளோரோஃபோர் குழுவின் உமிழ்வு ஸ்பெக்ட்ரம் ஏற்பி குழுவின் உறிஞ்சுதல் நிறமாலையுடன் ஒன்றுடன் ஒன்று உள்ளது."இரண்டு ஃப்ளோரோஃபோர்களுக்கு இடையிலான தூரம் பொருத்தமானதாக இருக்கும்போது (10 - 100 ஏ), நன்கொடையாளரிடமிருந்து ஏற்பவருக்கு ஃப்ளோரோஃபோர் ஆற்றலை மாற்றுவதைக் காணலாம்."ஆற்றல் பரிமாற்ற முறை ஏற்பியின் வேதியியல் கட்டமைப்பைப் பொறுத்தது:

1. மூலக்கூறு அதிர்வுகளாக மாற்றப்படுகிறது, அதாவது ஆற்றல் பரிமாற்றத்தின் ஒளிரும் ஒளி மறைந்துவிடும்.(ஏற்பி ஒரு ஒளி தணிப்பான்)

2. உமிழ்வு ஏற்பியை விட மிகவும் தீவிரமானது, இதன் விளைவாக இரண்டாம் நிலை ஒளிரும் நிறமாலையில் சிவப்பு மாற்றம் ஏற்படுகிறது.(வாங்கிகள் ஒளிரும் உமிழ்ப்பான்கள்).

நன்கொடையாளர் குழு (EDANS) மற்றும் ஏற்பி மரபணு (DABCYL) ஆகியவை எச்.ஐ.வி புரோட்டீஸின் இயற்கையான அடி மூலக்கூறுடன் ஒரே மாதிரியாக இணைக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் அடி மூலக்கூறு துண்டிக்கப்படாவிட்டால், DABCYL EDANS ஐத் தணித்து பின்னர் ஃவுளூரின் கண்டறிய முடியாததாகிவிடும்.எச்ஐவி-1 புரோட்டீஸ் துண்டிக்கப்பட்டவுடன், எடான்ஸ் இனி DABCYL ஆல் அணைக்கப்படாது, மேலும் EDANS லூசிஃபெரேஸ்கள் பின்னர் கண்டறியப்படலாம்.EDANS இன் ஃப்ளோரசன்ஸ் தீவிரத்தில் ஏற்படும் மாற்றங்களால் புரோட்டீஸ் தடுப்பான்களின் கிடைக்கும் தன்மையை கண்காணிக்க முடியும்.

FRET பெப்டைடுகள் பெப்டிடேஸ் குறிப்பிடப்படாத தன்மையைப் படிக்க வசதியான கருவிகள்.அதன் எதிர்வினை செயல்முறையை தொடர்ந்து கண்காணிக்க முடியும் என்பதால், இது நொதி செயல்பாட்டைக் கண்டறிய ஒரு வசதியான முறையை வழங்குகிறது.நன்கொடையாளர்/ஏற்றுபவரால் பெப்டைட் பிணைப்புகளின் நீராற்பகுப்புக்குப் பிறகு உற்பத்தி செய்யப்படும் பளபளப்பானது, நானோமொலார் செறிவுகளில் என்சைம் செயல்பாட்டின் அளவை வழங்குகிறது.FRET பெப்டைட் அப்படியே இருக்கும்போது, ​​​​அது உட்புற ஃபிளாஷ் திடீரென காணாமல் போவதைக் காட்டுகிறது, ஆனால் நன்கொடையாளர்/ஏற்றுபவருக்கு எதிரே உள்ள எந்த பெப்டைட் பிணைப்பு உடைந்தால், அது ஒரு ஃபிளாஷ் வெளியிடுகிறது, இது தொடர்ந்து கண்டறியப்பட்டு நொதியின் செயல்பாட்டை அளவிட முடியும்.